引言
隨著相關研究的不斷進展，免疫組化的應用范圍也逐漸拓展，如某些指標已經可以作為分子異常的替代性檢測。不過，實際工作中的免疫組化應用并非如我們想象的那么簡單，甚至在陰性、陽性的判讀方面，也會遇到某些糾結。
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隨著相關研究的不斷進展，免疫組化的應用范圍也逐漸拓展，如某些指標已經可以作為分子異常的替代性檢測。具體如琥珀酸脫氫酶復合體（succinate dehydrogenase complex，SDHx）與多種類型腫瘤有關，確定有SDH缺失對臨床治療具有重要指導意義。
SHDB免疫組化有助于SDH缺失的檢出，即表現為腫瘤細胞著色完全缺失。不過，也有部分SDH缺失腫瘤會有異常的胞質著色，可能會被誤判為“有著色”而解讀為SDH無缺失。近日，加利福尼亞大學舊金山分校病理專家Ding等人在《Histopathology》雜志發表文章，詳細總結了SDH缺陷型腫瘤中SDHB免疫組化異常著色的詳細特征。為幫助大家更好的了解相關問題并指導臨床實踐，我們將該文要點編譯介紹如下。
簡介
琥珀酸脫氫酶是一種線粒體酶復合體，具體包括四種亞基，即SDHA、SDHB、SDHC、SDHD。某些瘤種與SDH缺陷有關，涉及SDH復合體基因的復現性突變（recurring mutation）、或SDHC的表突變（epimutation），具體涉及的瘤種如嗜鉻細胞瘤/副節瘤、胃腸道間質瘤、腎細胞癌。SDH種系性致病性亞型的患者及家族成員容易發生多種類型的腫瘤，需終生注意隨診及篩查。因此臨床病理工作中應注意篩選出SDH缺陷型腫瘤并由此而指導遺傳學咨詢。
SDHx的突變狀態及具體涉及的亞基，在不同類型的腫瘤會有獨特臨床病理學表現。比如，SDHB致病性種系突變患者發生腹腔內及腎上腺外嗜鉻細胞瘤/副節瘤的幾率高，且轉移的風險較高。此外，相比普通型胃腸道間質瘤來說，SDH缺陷型胃腸道間質瘤對伊馬替尼治療耐藥，出現轉移的幾率高，甚至腫瘤較小、核分裂指數低的情況下就出現轉移。
免疫組化SDHB可用于SDH缺陷型腫瘤的診斷標記，因為絕大多數病例中，任何SDHx亞基的雙等位缺失都會導致SHDB免疫組化染色的完全缺失。一般將SDHB免疫組化結果分為完整/陽性（指彌漫、強陽性的顆粒狀胞質著色）或缺失/陰性（著色完全缺失）；非腫瘤組織（如腫瘤內的血管、間質、炎癥細胞）一般為彌漫、強陽性的胞質顆粒狀著色，可用于內對照。
圖1. 免疫組化SDHB：（左）SDH野生型嗜鉻細胞瘤，著色完好；（右）副節瘤，著色完全缺失。三角形箭頭為陽性內對照的血管。
不過，推測為SDH缺陷型腫瘤中出現SDHB免疫組化胞質著色的情況也有過報道，一般描述為微弱暈染（faint blush），并建議解讀為異常著色。本文原作者表示，日常工作中有些SDH缺陷型腫瘤可能SDHB免疫組化仍有不同程度的強陽性表達，會導致診斷困難。
研究內容及結果
本文共計收集了23位患者種系突變致病性/可能致病性SDHx亞型和/或經分子證實SDH缺陷型的23例腫瘤，其中嗜鉻細胞瘤/副節瘤19例，腎細胞癌3例，胃腸道間質瘤1例，具體臨床特征及分子特征請參閱原文。其中SDHB是最常見改變的亞基（14/23，61%），其中有2例同時有第二個亞基的致病性改變（1例為SDHC、1例為SDHA）。其余SDHA、SDHC、SDHD亞基改變均各為3例。
就SDHB的免疫組化來說，15例（65%）為腫瘤細胞著色完全缺失，8例（35%）為至少部分胞質著色。這8例中，80%以上的腫瘤細胞具有SDHB免疫組化著色，因此類似SDHB野生型腫瘤中的著色存在表現，只是低水平而已。這8例中有3例首診病理醫師評估免疫組化結果時歸為“可疑”。
上述8個病例仔細評估，其著色模式在細胞內分布、著色強度方面存在顯著的腫瘤間、腫瘤內異質性。其中7例表現為胞質暈染樣至細膩顆粒狀著色，5例為弱至中等程度，2例為局灶強陽性：病例1還有局灶的核旁蓄積；病例6為胞質彌漫強陽性，但主要為非顆粒狀，部分區域在細胞核旁表現為較強的球形蓄積。
圖2. （左）病例1，副節瘤，免疫組化SDHB，箭頭示核旁蓄積（高爾基體區著色）。（右）病例6，胃腸道間質瘤，免疫組化SDHB呈胞質強陽性著色，自彌漫性暈染至球形著色不等。三角形箭頭為陽性內對照的血管。
圖3：病例4，副節瘤，同一組織塊中有弱（左）至強（右）陽性著色，并有彌漫性暈染表現。三角形箭頭為陽性內對照的血管。
上述8個病例中，腫瘤細胞的SDHB免疫組化均不同于陽性內對照組織的粗糙顆粒狀胞質著色。不過，病例6中的這一特點也是散在。有趣的是，病例6其實兩個不同的蠟塊、由兩家專業單位獨立評估過SDHB免疫組化，其中一家報告為缺失，另一家報告為著色完整。這兩個蠟塊在本研究中進行的SDHB免疫組化，的確一個是完全缺失至彌漫弱陽性的胞質著色，另一個是程度不等的弱至中等程度彌漫胞質著色、伴核旁斑片狀濃集，散在腫瘤細胞呈較強的球狀胞質著色。
小結
此前已有SDH缺陷型腫瘤在SDHB免疫組化中表現為有著色的相關報道，描述為輕度暈染樣，并與SDHD突變有關，建議判讀為異常著色。本文研究表明，SDH缺陷型腫瘤中SDHB免疫組化異常著色的情況并不少見。當然，具體比例的差異可能和不同研究中病例的基因突變情況不同有關。與此前的研究相似，本文病例中SDHB免疫組化異常著色也主要見于SDHD突變患者，但其他SDHx亞基致病性異常的病例中也有異常著色情況，只是幾率較低。
重要的是，本文研究發現，免疫組化SDHB胞質著色的SDH缺陷型腫瘤的瘤細胞著色模式在著色強度和細胞內分布方面不同于非腫瘤的細胞：腫瘤細胞一般為低強度、暈染至細膩顆粒狀的胞質著色，而非腫瘤細胞為強陽性的胞質顆粒狀著色。鑒于本研究中病例均有SDH缺陷的分子證據，因此這類胞質著色因視為異常、判讀為異常著色。
還要注意的是，SDH缺陷型腫瘤中SDHB免疫組化可能是異質性的，部分病例中著色程度可能是中等至強陽性，如果僅憑SDHB免疫組化篩查可能會得出SDH非缺陷型的判斷。認識到有這種可能，并在高倍鏡下仔細的分析腫瘤與非腫瘤著色的細微差異，并尋求分子檢測證實，有助于對相關病例的精準判斷。
全文完
參考文獻
Ding CC, Chan S, Mak J, et al. An exploration in pitfalls in interpreting SDHB immunohistochemistry. Histopathology. 2022;10.1111/his.14681.
doi:10.1111/his.14681